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在CRISPR/Cas9基因编辑实验中高效转染sgRNA

作者 : admin 发表时间 : 2015-03-03

在CRISPR/Cas9基因编辑实验中,向导RNA(sgRNA)的设计是关键,这直接关系到实验的效果。然而,在筛选出高效的sgRNA后,后续的高效转染也是不可少的。此时,Takara的Xfect™ RNA转染试剂能助您一臂之力。

Xfect RNA转染试剂可将多种类型的RNA高效转染至哺乳动物细胞,包含了转染所需的全部试剂。转染mRNA可实现快速基因表达,排除DNA转染所引起的基因组整合。大多数转染试剂对细胞是有毒害作用的,而Xfect RNA转染试剂的细胞毒性很低。Xfect RNA转染试剂也用于高效转染单向导RNA(sgRNA)进行CRISPR/Cas9基因编辑。此转染试剂与RNA相结合时会形成可生物降解的纳米粒子,在高效转染的同时,不产生毒害副作用。

Xfect RNA转染试剂可兼容多种类型RNA,包括mRNA、单向导(sgRNA)、microRNA和siRNA。其操作流程简便,并且整个转染过程兼容血清。

与Xfect转染试剂相结合,Xfect RNA转染试剂可以高效地将DNA和RNA共转染至哺乳动物细胞。

实验例:Xfect™ RNA Transfection Reagent 可将sgRNA有效转染至HT1080细胞



* 数据来源于Takara Bio USA, Inc.

Panel A. 以CD81反义链5’端序列为模板,采用Guide-it sgRNA In Vitro Transcription Kit合成sgRNA。

Panel B. 采用Xfect RNA转染试剂转染50 pmol作用于CD81基因的sgRNA至稳定表达Cas9核酸酶的HT1080细胞(HT1080-Cas9,2.0 x 105 cells)中,转染一次(1x)或者两次(2x)。7天之后,采用与FITC荧光基团交联的CD81抗体进行免疫染色处理并采用流式细胞仪进行分析,计算没有与CD81抗体结合的细胞百分比例。将仅CD81抗体处理组和未处理组HT1080-Cas9作为对照,同样采用流式细胞仪进行分析。结果显示sgRNA处理组不能结合CD81抗体的细胞数量增加,说明 CRISPR/Cas9介导的CD81沉默是成功的。